如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)基？

培養(yǎng)基 是培養(yǎng)環(huán)境中最重要的組成部分，因?yàn)樗鼮榧?xì)胞生長提供了必要的營養(yǎng)、生長因子和激素，并調(diào)節(jié)培養(yǎng)物的pH值和滲透。

盡管最初的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)使用從組織提取物和體液中獲得的天然培養(yǎng)基進(jìn)行，但對標(biāo)準(zhǔn)化和培養(yǎng)基質(zhì)量的需求不斷增長，

促進(jìn)了化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基的發(fā)展。

培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基的三個(gè)基本類別分別是基礎(chǔ)培養(yǎng)基、減血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基，三種培養(yǎng)基對血清添加的要求有所不同。

基礎(chǔ)培養(yǎng)基大多數(shù)細(xì)胞系在含有氨基酸、維生素、無機(jī)鹽和碳源（例如葡萄糖）的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中生長良好，但在這些基礎(chǔ)培養(yǎng)基

的配方中必須進(jìn)一步添加血清。

減血清培養(yǎng)基減血清培養(yǎng)基是在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中，減少血清不良影響的另一種策略是使用減血清培養(yǎng)基。減血清培養(yǎng)基是富含營養(yǎng)

物質(zhì)和動(dòng)物源性因子的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方，可減少所需的血清量。

如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)基？無血清培養(yǎng)基無血清培養(yǎng)基（SFM）通過用適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)和激素配方替代血清，避免了使用動(dòng)物血清的問題。

無血清培養(yǎng)基配方適用于許多原代培養(yǎng)物和細(xì)胞系，包括用于生產(chǎn)重組蛋白的中國倉鼠卵巢（CHO）細(xì)胞系、各種雜交瘤細(xì)胞系

、昆蟲細(xì)胞系Sf9和Sf21（草地貪夜蛾）以及用作病毒生產(chǎn)宿主的細(xì)胞系（例如293、VERO、MDCK、MDBK等）。使用無血清

培養(yǎng)基的主要優(yōu)勢之一是，能夠通過選擇生長因子的適當(dāng)組合使培養(yǎng)基對特定細(xì)胞類型具有選擇性。下表列出了無血清培養(yǎng)基的

優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)。

細(xì)胞培養(yǎng)基最佳實(shí)踐方案下面是細(xì)胞培養(yǎng)基實(shí)踐方案的一些簡單的提示和技巧，可以幫助您確保細(xì)胞培養(yǎng)基保持最佳性能。

我們提供各種經(jīng)典的基礎(chǔ)培養(yǎng)基、減血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)基，以及生長因子、添加劑、抗生素和試劑，供您進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

。  如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)基？

細(xì)胞培養(yǎng)步驟

a、細(xì)胞傳代：如果未超過80%匯合度時(shí)，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；

如果細(xì)胞密度超80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加1-2ml消化液（0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA）至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞

消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL

培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱

中培養(yǎng)。

b、細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打

細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無血清凍存液（貨號：C7001），混勻后加入凍存管中。

4、 將凍存細(xì)胞直接放入-80℃冰箱即可，如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，則需在-80℃冰箱 中存放24小時(shí)以上再轉(zhuǎn)入液氮罐中。

C、細(xì)胞復(fù)蘇：

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精

擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞貼壁不牢，在運(yùn)輸過程中容易發(fā)生細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象?？砂创朔椒ǎ簩⑴囵B(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心

管，1000rpm離心5min，

收集上清作過渡培養(yǎng)（后期對比培養(yǎng)），沉淀加入胰酶1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，

最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 如何選擇細(xì)胞培養(yǎng)基？

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