1. 應(yīng)激反應(yīng)加劇甚至死亡

原因

若解凍后的直接暴露于不穩(wěn)定環(huán)境（如未預(yù)熱的培養(yǎng)基或溫度波動(dòng)的CO?），會(huì)導(dǎo)致滲透壓驟變或pH失衡

表現(xiàn)

細(xì)胞內(nèi)冰晶復(fù)融損傷加??；DMSO殘留毒性未被稀釋；部分敏感型（如RAW264）可能因營養(yǎng)競(jìng)爭(zhēng)加速老化

2.貼壁失敗或形態(tài)異常

關(guān)鍵因素

未更換新鮮培養(yǎng)基會(huì)導(dǎo)致殘留冷凍保護(hù)劑（如DMSO）抑制貼壁；若CO?濃度偏離5%，pH波動(dòng)使貼壁相關(guān)蛋白失活

案例

人肺腺癌細(xì)胞（HCC95）在pH>7時(shí)易變圓脫落；KGN若未及時(shí)去除DMSO會(huì)呈現(xiàn)長(zhǎng)梭形變異

3增殖停滯或代謝紊亂

數(shù)據(jù)支持

工程恢復(fù)活性的CHO在擴(kuò)增階段需要嚴(yán)格監(jiān)測(cè)密度/活性；若未按標(biāo)準(zhǔn)補(bǔ)充血清（如20%優(yōu)化濃度），分裂周期延長(zhǎng)

連鎖反應(yīng)

老廢代謝物積累（如氨）進(jìn)一步抑制線粒體功能

解決方案

立即干預(yù)措施

-更換預(yù)熱的培養(yǎng)基（含高濃度血清緩沖滲透壓）

-臺(tái)盼藍(lán)染色評(píng)估存活率>80%，否則二次離心去除死

2.長(zhǎng)期適應(yīng)性調(diào)整

-RAW264等空間敏感型需降低接種密度至10?~10?/T75

-添加生長(zhǎng)因子（如β-巰基乙醇對(duì)NCI929必需）

總結(jié)

環(huán)境參數(shù)的延遲校正會(huì)通過物理損傷（溫度）、化學(xué)毒性（DMSO）、生物競(jìng)爭(zhēng)（營養(yǎng)）三重途徑降低成功率