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DNAOUT大提柱式質(zhì)粒——操作、使用及效果

更新時(shí)間:2025-08-20      點(diǎn)擊次數(shù):541

本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理, 再通過(guò)離心吸附柱,專(zhuān)一結(jié)合DNA,最后洗去雜質(zhì),高效快速提取質(zhì)粒DNA,全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從50-100 mL過(guò)夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)300-500     μg的高純度質(zhì)粒DNA(OD260/OD280=1.8-2.0),可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。

1. 快速、步驟少,整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。

2. 離心柱最大吸附量為500 μg,100mL高拷貝的菌液一般能得到700 μg左右的質(zhì)粒DNA,100 mL低拷貝的菌液一般能得到150-350 μg質(zhì)粒DNA。

3. 純度高,采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。

4. 產(chǎn)量高,每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 μg/mL。

5. 用途廣,適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。

6. 價(jià)格低,比多數(shù)國(guó)內(nèi)同類(lèi)產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。

使用及效果

收集50-100 mL過(guò)夜培養(yǎng)飽和菌液,離心棄上清后用6 mL溶液A重懸沉淀,再與6 mL溶液B混勻,再加入8 mL溶液C,混勻,室溫靜止2分鐘,離心10分鐘, 將上清轉(zhuǎn)移到DNA純化柱中,靜置2分鐘,離心后棄收集管中的廢液,用10  mL的通用洗柱液洗滌離心柱兩次。干甩一次,將離心柱置于新的50 mL離心管(自備)中,用1 mL DNA洗脫液洗脫2-5次即得質(zhì)粒DNA。

圖注:高拷貝質(zhì)粒pWXL001從70 mL過(guò)夜培養(yǎng)菌液中提取得到。從左到右分別為第一次,第二次,第三次,第四次和第五次洗脫,每次洗脫體積均為1 mL。上樣體積為10 μL,最后在0.8%瓊脂糖凝膠中電泳后紫外觀察。使用的染料為綠如藍(lán)染料,電泳緩沖液為超快電泳液。第一次洗脫約25% 的質(zhì)粒DNA,第二次洗脫約35%的質(zhì)粒DNA;第三次洗脫約20%的質(zhì)粒DNA;第四次洗脫約10%的質(zhì)粒DNA;第五次洗脫約8%的質(zhì)粒DNA。本次實(shí)驗(yàn)質(zhì)粒DNA產(chǎn)量是465.5 μg,產(chǎn)率是6.65 μg/mL(實(shí)驗(yàn)編號(hào)305095)。


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