HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase試劑經(jīng)酶電子重構(gòu)架和進(jìn)化

篩選（in silico Design & invitro Evolution），其為 Bst 3.0

的升級(jí)品，用于 DNA 的 LAMP 擴(kuò)增。

性能提升包括：（1）Bst 3.2 包含熱啟動(dòng) Aptamer，

該配體確保酶在<30℃時(shí)，酶活封閉效率>90%,在>60℃時(shí)

1min 內(nèi)釋放酶活。該特性利于室溫建立反應(yīng)體系，

并大幅降低了低溫條件下的非特異擴(kuò)增；（2）反應(yīng)溫度提

升到 70℃，大幅降低引物 Dimer 的形成，提高擴(kuò)增特異

性，并使得粗樣品核酸釋放更加充分；（3）包含 Helicaser，

因此，允許在不使用 F3/B3 引物的情況下進(jìn)行 eLAMP 擴(kuò)

增（easy LAMP），并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。

這將進(jìn)一步降低非特異擴(kuò)增，并使得擴(kuò)增均一性大幅提

升。

名 稱 1600 U 16 KU

HotStart Bst 3.2（16U/μl） 100 μl 1 ml

10xIso Buffer4.2 (Mg2+ free) 1 ml 20 ml

100mM Mg2+ 1 ml 20 ml

注意： HotStart Bst 3.2 DNA Polymerase（16U/μl）與

10xIso Buffer4.2 均不含有甘油，可用于凍干體系的建立。

儲(chǔ)存：長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于-20℃以下（18 個(gè)月有效）；制品

反復(fù)凍融 10 次不影響性能，但應(yīng)避免反復(fù)凍融；制品一

經(jīng)融化推薦置于 2-8℃保存，在此條件下制品穩(wěn)定儲(chǔ)存 1

個(gè)月。

其它說(shuō)明：

（1） Bst 4.2 & 3.2 Polymerase 在用于 LAMP 擴(kuò)增時(shí)的

推薦反應(yīng)溫度為 70℃。由于 Helicaser 的反應(yīng)溫度為

70℃，因此該酶在 65℃擴(kuò)增時(shí)，性能會(huì)大幅下降。

（2）制品中包含高濃度的鹽組分，使用時(shí)做好個(gè)人防護(hù)，

防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入，一旦接

觸或吸入，請(qǐng)用大量的清水沖洗。

（3）防止氣溶膠污染，盡可能進(jìn)行分區(qū)操作。

1. 10xLAMP Primer Mix 的配制

標(biāo)準(zhǔn) LAMP eLAMP

FIP/BIP 16 µM each 8~16 µM each

LF/LB 4~8 µM each 4~8 µM each

F3/B3 2 µM each 非必須

注意：eLAMP（easy LAMP）為去除 F3/B3 引物的方法，

為 Bst4.2-3.2 系列專用的使用策略，對(duì)于大多數(shù)引物組，

在 Helicaser 的加持下，擴(kuò)增速度幾乎不受影響。

2. 配制 LAMP 反應(yīng)體系

10xIso Buffer4.2(Mg2+ free) 2.5 μl

100 mM Mg2+

 1.5 μl

dNTP Mixture（10 mM each） 3 μl

10xLAMP Primer Mix 2.5 μl

HotStart Bst 3.2（16U/μl） 0.25-0.5 μl

模板 DNA X μl

ddH2O 到總體積 25 μl

注意：關(guān)于 Bst 酶的用量，對(duì)于絕大多數(shù)的 LAMP 擴(kuò)增

來(lái)講，0.16-0.32U/µl 的濃度，均可獲得理想的擴(kuò)增結(jié)果，

必要條件下進(jìn)行其它調(diào)整。

3. 擴(kuò)增反應(yīng)

反應(yīng)體系配好后，置于 70°C 反應(yīng) 20~40min。

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